Név: Antitest sztrippelő oldat
Katalógusszám: L7710A, 500ml * GV0480, 500ml 5X
* Elegendő reagens 3000 cm2 vagy 200-400 membráncsíkhoz vagy 20-40 standard blothoz
• Tárolás: RT-n tárolandó (hosszú tároláshoz: + 4C °) (L)
● Nincs csípős szagú merkaptoetanol. Időt takaríthat meg.
● Az antitestek eltávolítása szobahőmérsékleten történik. Nincs szükség a blotok megmelegítésére Költséges minta megtakarítása
● Az antitesteket szobahőmérsékleten csak körülbelül 15 perc alatt
takaríthatjuk meg.
Western Blot sztrippelő puffer
A Western BLoT sztrippelő puffer egy megoldás primer és szekunder antitestek eltávolítására a vizsgált Western blot membránokról. Az antitest eltávolítása ezzel a pufferrel enyhe körülmények között történhet (szobahőmérséklet, 30 perc inkubáció), minimalizálva az immobilizált fehérje veszteségét a membránból. PVDF membrán használata esetén ugyanaz a membrán 2–5 alkalommal lehúzható és újrapróbálható. A sztrippelés után a membránokat újra szondázhatjuk, vagy más primer antitest koncentrációval, vagy teljesen más primer antitesttel.
Macska. # | Termék | Méret | Engedély | Mennyiség | Részletek | |
---|---|---|---|---|---|---|
T7135A | Western BLoT sztrippelő puffer | 500 ml | * | |||
A Western BLoT sztrippelő puffer egy olyan reagens, amely eltávolíthatja a primer és szekunder antitesteket a Western blot membránokról. A sztrippelő pufferrel végzett kezelés után a membrán újrafelhasználható; vagy a primer antitest eltérő koncentrációjával, vagy teljesen eltérő primer antitesttel lehet próbálni a membránt. Ezzel a termékkel az antitesteltávolítási reakció viszonylag enyhe körülmények között (szobahőmérsékleten, 30 perc) megy végbe, és ezért a membránból nagyon kevés az immobilizált fehérje vesztesége. PVDF membrán használata esetén ugyanazt a membránt 2–5 alkalommal lehúzhatjuk és újra szondázhatjuk. |
Blokkoló puffer | Blokkoló ügynök | Fénypontok | Mikor kell használni | Elérhető formátumok |
---|---|---|---|---|
StartingBlock |
Szérum és biotinmentes egyszeri tisztított fehérje |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
Blocker FL |
Egyetlen tisztított fehérje |
|
|
10X |
Pierce tiszta tej blokkoló puffer |
Tisztított és stabilizált tejfehérjék |
|
|
Borát, pH 7,6 |
SuperBlock |
Szérum és biotinmentes egyszeri tisztított glikoprotein |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
SEA BLOCK blokkoló puffer |
Steelhead lazac szérum |
|
|
PBS |
BSA blokkoló |
Tisztított szarvasmarha szérum albumin |
|
|
PBS TBS |
Blokkoló kazein |
Tisztított kazein |
|
|
PBS TBS |
Blokkoló BLOTTO |
Zsírmentes száraz tej |
|
|
TBS |
Fehérje-mentes |
Nem fehérjét blokkoló vegyület |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
Pierce gyors blokkoló puffer |
Egyetlen tisztított fehérje |
|
|
TBS |
SuperSignal Western Blot Enhancer |
Membránkezelés alacsony bőségű vagy gyenge immunreaktivitású antitestek esetén |
|
|
Használatra kész |
A Western blotok eltávolítása és újbóli vizsgálata számos előnyt kínál:
- Drága vagy csak korlátozott mennyiségben rendelkezésre álló minták megőrzése;
- Egy adott blot elemzése több különböző antitest alkalmazásával, például altípus- vagy izoform-specifikus antitestek felhasználásával;
- Az anomális eredmények újbóli elemzése és megerősítés ugyanazon vagy eltérő antitesttel;
- Helytelen antitesttel történő inkubálás során fellépő hibák kijavítása;
- Költségmegtakarítás a reagensekben és az időben ugyanazon blot újrafelhasználásával.
Számos protokollt tettek közzé az antitestek Western-blotokról való eltávolítására, beleértve azokat is, amelyek alacsony pH-t, hőt és detergenteket, valamint kaotrop szereket használnak. Három ajánlott protokollt mutatunk be alább. Az első bármely kemilumineszcens szubsztrátrendszerre alkalmazható, és detergens és hő kombinációját használja az antitestek felszabadítására. A másodikat általában olyan alkalmazásokban használják, ahol az antitesteket el kell választani egy antigéntől, és alacsony pH-értéket alkalmaznak, hogy az antitest szerkezetét oly módon változtassák meg, hogy a kötőhely már nem legyen aktív.

A harmadik protokoll a ReBlot ™ Plus Western Blot újrahasznosító készletet alkalmazza, amelyet kifejezetten az antitestek Western blot membránokról történő eltávolítására fejlesztettek ki. Ennek a megközelítésnek az előnyei a következők:
- A β-merkaptoetanolhoz kapcsolódó szagok elkerülése.
- Szobahőmérsékleten történő feldolgozás.
- Az antitestek eltávolítása 15 perc alatt.
Ezen módszerek egyike sem távolítja el a kromogén detektáló rendszerekből (például BCIP, 4CN, DAB és TMB) keletkező színes csapadékokat. Azonban továbbra is lehetséges a blot elemzése egy másik, más célfehérjére specifikus antitesttel.
Ezeket a protokollokat általában csak minőségi célokra szabad felhasználni, kivéve, ha bebizonyosodott, hogy a sztrippelés nem befolyásolja mennyiségileg az adott antigént. Az alkalmazott membrán módjától és típusától függően sok antigén ellenáll legalább 5 sztrippelési ciklusnak. Figyelembe kell venni azonban, hogy minden egyes sztrippelési ciklus során a membránnal immobilizált fehérjék kis részei eltávolodnak. Ha több antigént kell detektálni egymás után, akkor ajánlott olyan antigénekkel kezdeni, amelyek várhatóan alacsonyabb bőségben fordulnak elő, vagy kevesebb jelet eredményeznek.
Íme néhány további javaslat, amikor egy Western blot kísérletet terveznek egy vagy több forduló antitest sztrippeléssel.
- A PVDF membránok robusztusabbak, mint a nitrocellulóz, ezért minden olyan eljáráshoz ajánlott, amely antitest-sztrippelést tartalmaz.
- A PVDF membránok szárítása közvetlenül az SDS-PAGE gélről való átvitel után javítja a fehérjék membránhoz való kötődését, és különösen ajánlott, ha többszörös sztrippelést terveznek. A száraz PVDF membránokat alkoholral kell megnedvesíteni az immundetektálás első fordulója előtt.
- Először fedezze fel az alacsony bőségű antigéneket.
- Használjon alacsony affinitású antitesteket a nagy affinitású antitestek előtt.
- Fontos: Bár a PVDF-blot szárítása ajánlott azonnal az átvitel után, a blotot nem szabad hagyni megszáradni az immundetektálási körök között. Bármely maradék antitestmolekula végleg kötődik a membránhoz, ha hagyják megszáradni.
WB / Antibody Stripping Buffer |
|||
20-abx090656 | Abbexa |
|
|
WB / Antibody Stripping Buffer |
|||
abx090671-200ml | Abbexa | 200 ml | EUR 226.8 |
West Ez Stripping Buffer |
|||
S2100-006 | GenDepot | 60ml | EUR 97.2 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
|||
S2100-050 | GenDepot | 500ml | EUR 254.4 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
|||
S2100-100 | GenDepot | 2x500ml | EUR 336 |
Western blot recycling stripping buffer, 50 ml (10X) |
|||
90101 | Alpha Diagnostics | 50 ml | EUR 285.6 |
Phospho Antibody Stripping Solution |
|||
AKR-102 | Cell Biolabs | 1 kit | EUR 470.4 |
Description: This reagent allows you to strip phospho antibodies from protein blots and subsequently re-probe the same blot. |
Dura Mater Stripping Forcep Straight |
|||
INS6132 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 84.36 |
Dura Mater Stripping Forcep Angled |
|||
INS6134 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 84.36 |
T-Pro Western Blot Stripping Reagent |
|||
JB11-K002 | T-Pro Biotechnology | 500ml/BT | EUR 213.6 |
Antibody diluent buffer |
|||
AR1106-2 | BosterBio | 12ml | EUR 109.2 |
Tricine buffer |
|||
20-abx082551 | Abbexa |
|
|
Wash Buffer |
|||
abx098952-20ml | Abbexa | 20 ml | EUR 109.2 |
Coating Buffer |
|||
abx098970-1vial | Abbexa | 1 vial | EUR 184.8 |
Blocking Buffer |
|||
abx098972-1vial | Abbexa | 1 vial | EUR 184.8 |
Lysis Buffer |
|||
abx098984-LysisBuffer120ml | Abbexa | Lysis Buffer 1 (20 ml) | EUR 184.8 |
Lysis Buffer |
|||
abx098984-LysisBuffer3100ml | Abbexa | Lysis Buffer 3 (100ml) | EUR 276 |
Lysis Buffer |
|||
abx098984-LysisBuffer420ml | Abbexa | Lysis Buffer 4 (20 ml) | EUR 184.8 |
Binding Buffer |
|||
abx290019-50ml | Abbexa | 50 ml | EUR 276 |
Wash Buffer |
|||
abx293002-30ml | Abbexa | 30 ml | EUR 126 |
Binding Buffer |
|||
BB10X-50ML | ImmunoStep | 50 ML | EUR 136.44 |
ADA buffer |
|||
AD0003 | Bio Basic | 25g | EUR 77.75 |
Wash Buffer |
|||
KF17356 | Neuromics | 500 ml | EUR 214.8 |
RIPA Buffer |
|||
GR103019 | Genorise Scientific | 50 mL | EUR 70.8 |
Anode Buffer |
|||
GR103036 | Genorise Scientific | 1 L | EUR 106.8 |
Cathode Buffer |
|||
GR103037 | Genorise Scientific | 1 L | EUR 130.8 |
10xTaq Buffer |
|||
PCRB60 | Bio Basic | 4x1.5ml, 6ml | EUR 70.44 |
PBS Buffer |
|||
RM00012 | Abclonal | 2L | EUR 122.4 |