Név: Antitest sztrippelő oldat
Katalógusszám: L7710A, 500ml * GV0480, 500ml 5X
* Elegendő reagens 3000 cm2 vagy 200-400 membráncsíkhoz vagy 20-40 standard blothoz
• Tárolás: RT-n tárolandó (hosszú tároláshoz: + 4C °) (L)
● Nincs csípős szagú merkaptoetanol. Időt takaríthat meg.
● Az antitestek eltávolítása szobahőmérsékleten történik. Nincs szükség a blotok megmelegítésére Költséges minta megtakarítása
● Az antitesteket szobahőmérsékleten csak körülbelül 15 perc alatt
takaríthatjuk meg.
Western Blot sztrippelő puffer
A Western BLoT sztrippelő puffer egy megoldás primer és szekunder antitestek eltávolítására a vizsgált Western blot membránokról. Az antitest eltávolítása ezzel a pufferrel enyhe körülmények között történhet (szobahőmérséklet, 30 perc inkubáció), minimalizálva az immobilizált fehérje veszteségét a membránból. PVDF membrán használata esetén ugyanaz a membrán 2–5 alkalommal lehúzható és újrapróbálható. A sztrippelés után a membránokat újra szondázhatjuk, vagy más primer antitest koncentrációval, vagy teljesen más primer antitesttel.
Macska. # | Termék | Méret | Engedély | Mennyiség | Részletek | |
---|---|---|---|---|---|---|
T7135A | Western BLoT sztrippelő puffer | 500 ml | * | |||
A Western BLoT sztrippelő puffer egy olyan reagens, amely eltávolíthatja a primer és szekunder antitesteket a Western blot membránokról. A sztrippelő pufferrel végzett kezelés után a membrán újrafelhasználható; vagy a primer antitest eltérő koncentrációjával, vagy teljesen eltérő primer antitesttel lehet próbálni a membránt. Ezzel a termékkel az antitesteltávolítási reakció viszonylag enyhe körülmények között (szobahőmérsékleten, 30 perc) megy végbe, és ezért a membránból nagyon kevés az immobilizált fehérje vesztesége. PVDF membrán használata esetén ugyanazt a membránt 2–5 alkalommal lehúzhatjuk és újra szondázhatjuk. |
Blokkoló puffer | Blokkoló ügynök | Fénypontok | Mikor kell használni | Elérhető formátumok |
---|---|---|---|---|
StartingBlock |
Szérum és biotinmentes egyszeri tisztított fehérje |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
Blocker FL |
Egyetlen tisztított fehérje |
|
|
10X |
Pierce tiszta tej blokkoló puffer |
Tisztított és stabilizált tejfehérjék |
|
|
Borát, pH 7,6 |
SuperBlock |
Szérum és biotinmentes egyszeri tisztított glikoprotein |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
SEA BLOCK blokkoló puffer |
Steelhead lazac szérum |
|
|
PBS |
BSA blokkoló |
Tisztított szarvasmarha szérum albumin |
|
|
PBS TBS |
Blokkoló kazein |
Tisztított kazein |
|
|
PBS TBS |
Blokkoló BLOTTO |
Zsírmentes száraz tej |
|
|
TBS |
Fehérje-mentes |
Nem fehérjét blokkoló vegyület |
|
|
PBS TBS PBST TBST |
Pierce gyors blokkoló puffer |
Egyetlen tisztított fehérje |
|
|
TBS |
SuperSignal Western Blot Enhancer |
Membránkezelés alacsony bőségű vagy gyenge immunreaktivitású antitestek esetén |
|
|
Használatra kész |
A Western blotok eltávolítása és újbóli vizsgálata számos előnyt kínál:
- Drága vagy csak korlátozott mennyiségben rendelkezésre álló minták megőrzése;
- Egy adott blot elemzése több különböző antitest alkalmazásával, például altípus- vagy izoform-specifikus antitestek felhasználásával;
- Az anomális eredmények újbóli elemzése és megerősítés ugyanazon vagy eltérő antitesttel;
- Helytelen antitesttel történő inkubálás során fellépő hibák kijavítása;
- Költségmegtakarítás a reagensekben és az időben ugyanazon blot újrafelhasználásával.
Számos protokollt tettek közzé az antitestek Western-blotokról való eltávolítására, beleértve azokat is, amelyek alacsony pH-t, hőt és detergenteket, valamint kaotrop szereket használnak. Három ajánlott protokollt mutatunk be alább. Az első bármely kemilumineszcens szubsztrátrendszerre alkalmazható, és detergens és hő kombinációját használja az antitestek felszabadítására. A másodikat általában olyan alkalmazásokban használják, ahol az antitesteket el kell választani egy antigéntől, és alacsony pH-értéket alkalmaznak, hogy az antitest szerkezetét oly módon változtassák meg, hogy a kötőhely már nem legyen aktív.

A harmadik protokoll a ReBlot ™ Plus Western Blot újrahasznosító készletet alkalmazza, amelyet kifejezetten az antitestek Western blot membránokról történő eltávolítására fejlesztettek ki. Ennek a megközelítésnek az előnyei a következők:
- A β-merkaptoetanolhoz kapcsolódó szagok elkerülése.
- Szobahőmérsékleten történő feldolgozás.
- Az antitestek eltávolítása 15 perc alatt.
Ezen módszerek egyike sem távolítja el a kromogén detektáló rendszerekből (például BCIP, 4CN, DAB és TMB) keletkező színes csapadékokat. Azonban továbbra is lehetséges a blot elemzése egy másik, más célfehérjére specifikus antitesttel.
Ezeket a protokollokat általában csak minőségi célokra szabad felhasználni, kivéve, ha bebizonyosodott, hogy a sztrippelés nem befolyásolja mennyiségileg az adott antigént. Az alkalmazott membrán módjától és típusától függően sok antigén ellenáll legalább 5 sztrippelési ciklusnak. Figyelembe kell venni azonban, hogy minden egyes sztrippelési ciklus során a membránnal immobilizált fehérjék kis részei eltávolodnak. Ha több antigént kell detektálni egymás után, akkor ajánlott olyan antigénekkel kezdeni, amelyek várhatóan alacsonyabb bőségben fordulnak elő, vagy kevesebb jelet eredményeznek.
Íme néhány további javaslat, amikor egy Western blot kísérletet terveznek egy vagy több forduló antitest sztrippeléssel.
- A PVDF membránok robusztusabbak, mint a nitrocellulóz, ezért minden olyan eljáráshoz ajánlott, amely antitest-sztrippelést tartalmaz.
- A PVDF membránok szárítása közvetlenül az SDS-PAGE gélről való átvitel után javítja a fehérjék membránhoz való kötődését, és különösen ajánlott, ha többszörös sztrippelést terveznek. A száraz PVDF membránokat alkoholral kell megnedvesíteni az immundetektálás első fordulója előtt.
- Először fedezze fel az alacsony bőségű antigéneket.
- Használjon alacsony affinitású antitesteket a nagy affinitású antitestek előtt.
- Fontos: Bár a PVDF-blot szárítása ajánlott azonnal az átvitel után, a blotot nem szabad hagyni megszáradni az immundetektálási körök között. Bármely maradék antitestmolekula végleg kötődik a membránhoz, ha hagyják megszáradni.
Stripping Buffer |
|||
GR103020 | Genorise Scientific | 500 mL | EUR 89 |
WB Stripping Buffer |
|||
AR0153 | BosterBio | 100mL (for 10 assays for an 5 × 8.5cm blot) | EUR 133.2 |
West Ez Stripping Buffer |
|||
S2100-006 | GenDepot | 60ml | EUR 97.2 |
Microarray Stripping Buffer 1X |
|||
10250005-1 | Bio-WORLD | 25 mL | EUR 21.5 |
Microarray Stripping Buffer 1X |
|||
10250005-2 | Bio-WORLD | 100 mL | EUR 60.54 |
Nitrocellulose Stripping Buffer 10X |
|||
10750015-1 | Bio-WORLD | 250 mL | EUR 34.22 |
Nitrocellulose Stripping Buffer 10X |
|||
10750015-2 | Bio-WORLD | 500 mL | EUR 60.54 |
Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8 |
|||
20960004-1 | Bio-WORLD | 250 mL | EUR 23.24 |
Blot Stripping Buffer 4X, pH 6.8 |
|||
20960004-2 | Bio-WORLD | 500 mL | EUR 53.99 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
20920002-1 | Bio-WORLD | 500 mL | EUR 24.17 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
20920002-2 | Bio-WORLD | 1 L | EUR 36.14 |
Tris-SDS Stripping Buffer, pH 6.8 |
|||
20920002-3 | Bio-WORLD | 4 L | EUR 115.76 |
Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5 |
|||
20960005-1 | Bio-WORLD | 250 mL | EUR 25.45 |
Blot Stripping Buffer II 4X, pH 2.5 |
|||
20960005-2 | Bio-WORLD | 500 mL | EUR 42.24 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
|||
S2100-050 | GenDepot | 500ml | EUR 254.4 |
West Ez Stripping Buffer, Economic Size |
|||
S2100-100 | GenDepot | 2x500ml | EUR 336 |
Nylon Membrane Stripping Buffer 10X, Sterile |
|||
10750016-1 | Bio-WORLD | 250 mL | EUR 26.54 |
Description: Tris/EDTA/Denhardts (TE+Denhardts) |
Nylon Membrane Stripping Buffer 10X, Sterile |
|||
10750016-2 | Bio-WORLD | 500 mL | EUR 59.21 |
Description: Tris/EDTA/Denhardts (TE+Denhardts) |
Western blot recycling stripping buffer, 50 ml (10X) |
|||
90101 | Alpha Diagnostics | 50 ml | EUR 285.6 |
Phospho Antibody Stripping Solution |
|||
AKR-102 | Cell Biolabs | 1 kit | EUR 470.4 |
Description: This reagent allows you to strip phospho antibodies from protein blots and subsequently re-probe the same blot. |
101Bio WB Stripping Solution |
|||
P5W3 | 101Bio | - | Ask for price |
Dura Mater Stripping Forcep Angled |
|||
INS6134 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 112.8 |
Dura Mater Stripping Forcep Straight |
|||
INS6132 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 112.8 |
T-Pro Western Blot Stripping Reagent |
|||
JB11-K002 | T-Pro Biotechnology | 500ml/BT | EUR 213.6 |
Human IgG-RF stripper/Adsorbent (1 ml, sufficient for stripping 50 samples of 100 ul human serum/plasma) |
|||
RFS-1 | Alpha Diagnostics | 1 ml | EUR 123.6 |
100ML ProtoLift Western Strip Buffer |
|||
NAT1256 | Scientific Laboratory Supplies | 100ML | EUR 92.7 |
PhastGel SDS Buffer Strips pack of 10 |
|||
17051601 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 116.28 |
PhastGel Native Buffer Strips pack of 10 |
|||
17051701 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | EUR 116.28 |