LEÍRÁS A
gyöngy- és oszlopalapú elválasztási módszerek nagyban támaszkodnak az affinitásmegkötő rendszerek sebességére és könnyűségére. A ligandumokat, például a sztreptavidint, az antitesteket és a
lektineket mind a specifikusan jelölt célpontok befogására, mind a ligandumkötő partneret természetesen expresszáló sejtek és biomolekulák izolálására használják.
A növényi lektinek, például a Concanavalin A (Con A) egyedülálló szacharidkötő tulajdonságai hasznosgá tették őket a szérumban és a sejtlizátumban lévő glikánprezentáló sejtek és glikoproteinek jelölésére és izolálására. A lektineket emellett a sejtek adhéziós vizsgálataiban, a limfociták aktiválására és
a szénhidrát alapú terápiák feltárására használták.
A Con A-val bevont BioMag Plus mikrorészecskék kényelmes módszert kínálnak a mannosil- és glükozil-tartalmú glikoproteinek és
poliszacharidok szérum- vagy sejtlizátumból történő izolálására , vagy más lektin / glikán-közvetített folyamatok vizsgálatára. A BioMag Concanavalin A-t a
CUT & RUN-hoz is használták , amely egy kromatinprofil protokoll, amelynek számos fő előnye van a ChIP-hez képest. (lásd a hivatkozásokat)
JELLEMZŐK A
konkanavalin A (Con A) kovalensen kapcsolódik a funkcionalizált BioMag®Plus
részecskékhez, szérum- és sejtkivonatokból származó glikoprotein-izolációkban történő alkalmazásra.
A Con A egy 104 000 Da fehérje, amely négy azonos alegységből áll, és
aktív dimerként vagy tetramerként létezik a pH-tól függően. Szénhidrátkötése
a partnerek az α-D-glükóz és az α-D-mannóz, a
C-3, C-4 és C-6 nem módosított OH-csoportjaival , valamint a fehérjék és peptidek terminális glükózmaradékával.
A Con A agglutinálja a vörösvértesteket (RBC), kölcsönhatásba lép az immunglobulin
glikopeptidekkel és limfocita mitogén. Megköti néhány baktériumot.
Con A kötődést fémionok közvetítik, amelyek stabilizálódnak a konformációban. Minden
kötési helyhez kalcium- és mangánionok szükségesek, és az EDTA-val
vagy más fém-kelátképzőkkel ellátott pufferek használata a szénhidrát-kötő képesség elvesztését eredményezi.
Átlagos átmérője: ~ 1,0 jim
Koncentráció: 5 mg / ml
Con A-Bound: meghatározva A280
ANYAG
szállított anyagoknak
3 ml vagy 10 ml Con A bevont részecskék 10 mM PBS-ben 0,1% nátrium-azidot
szükséges anyag
1,5 ml vagy 2 ml-es mikrocentrifuga csövekbe
emlős szérumproteinek: 0,4 ml 1:20 hígítás PBS / vizsgálati
kötőpuffer: 1x PBS + 0,1% NaN3
+ 1 mM MgCl2
+ 1 mM MnCl2
+ 1 mM CaCl2
(pH 7,4)
Mosópuffer: 1x PBS + 0,1% NaN3
+ 1mM MgCl2
+ 1mM MnCl2
+ 1mM CaCl2
(pH 7,4) + 0,1% Tween® 20
Con A részecske-elúciós puffer: 5mM Tris (pH 8,0) ) + 0,15 M NaCl + 0,05% SDS + 1 M glükóz
Precíziós pipetta eldobható hegyekkel 20-200µL, 200-1000µL adagolására
Mikrocentrifuga csőelválasztó: 1,5 ml mágneses szeparátor (LS001 katalógusszám) BioMag Multi-6 mikrocentrifuga csőelválasztó (MS002 katalógusszám)
Vortex keverő és csőforgató .
ELJÁRÁS A
kutatóknak javasoljuk, hogy optimalizálják a részecskék felhasználását bármely alkalmazásban.
1. Készítsen 0,4 ml szérum mintát 1:20 arányú hígítással 10 mM PBS-sel.
2. Tegyen 1 ml BioMag®Plus Con A részecskét egy tiszta mikrocentrifuga csőbe. Helyezze a csövet egy mágnesre, hogy elválassza a részecskéket az oldattól.
Óvatosan távolítsa el és dobja el az oldatot.
3. Mossa meg a részecskéket 1 ml kötőpuffer hozzáadásával. Jól összekeverni.
4. Ismételje meg a részecskemosást még egyszer. Az utolsó mosás után távolítsa el a felülúszót.
5. Adjon hozzá 0,1 ml kötőpuffert az 1. lépésből származó szérummintához. Adja hozzá a mintát a részecskékhez, és inverzióval vagy örvényléssel alaposan keverje össze a részecskék újraszuszpendálásához.
6. Helyezze a mintát egy csőforgatóra, és keverje szobahőmérsékleten 10-30 percig.
7. Vegye ki a mintát a forgórészből, és helyezze egy mágneses szeparátorba. Óvatosan távolítsa el a megtisztított felülúszót.
8. Mossa meg a részecskéket 0,5 ml mosópuffer hozzáadásával. Keverje jól megfordítással vagy örvénykeveréssel.
9. Ismételje meg a 7-8. Lépést. Szuszpendáljuk újra a részecskéket 0,5 ml mosópufferrel, és tegyük 5 percre a cső rotátorára.
10. Ismételje meg a 7–9. Lépést.
11. Helyezze vissza a részecskék csövét a mágneses szeparátorra, és óvatosan távolítsa el / dobja el a felülúszót.
12. Adjon 250 µL eluáló puffert a részecskékhez. Keverje össze a csövet a részecskék újraszuszpendálásához, és helyezze a csövet szobahőmérsékleten 10-30 percig a forgórészre.
13. Helyezze vissza a részecskék csövét a mágneses szeparátorra, óvatosan távolítsa el az eluátumot, és töltse át egy tiszta mikrocentrifuga csőbe későbbi felhasználás vagy tárolás céljából.
14. Ismételje meg a 12-13. Lépéseket. Az eluátumokat egyesíthetjük és kicsaphatjuk. Az eluátumokat jégen tárolja azonnali felhasználás céljából, vagy fagyassza le tartós tárolás céljából.
MEGJEGYZÉSEK
• Kerülje a reagensek EDTA-val vagy más fémkelátképzőkkel történő használatát, mivel ez csökkenti a kötőpuffer hatékonyságát.
• Az érzékeny glikoproteinek izolálásakor proteázinhibitorok alkalmazhatók.
• Alacsony glikoprotein-visszanyerés kapcsolható az eluálási inkubációs idő 10 percen túli megnövelésével és / vagy a részecskék 200 µl
SDS-PAGE mintapufferben való forralásával 5 percig, majd mágnesesen elválasztva a részecskéket az eluátumtól. (Megjegyzés: A forralás leválaszthat néhány lektint, és nem
specifikusan kötött fehérjéket is felszabadíthat.)
• Futtasson eluátummintákat SDS-PAGE 4-20% -os trisz-glicin elektroforézis gélen, és festse meg a glikoprotein sávokat a GlycoGel Stain Kit segítségével
(Polysciences ‘Catalog Code 24693) vizualizálására.
• A GlycoGel festés után festse meg a gélt a Coomassie G250 (1 ml vagy 2 ml 0,5% Coomassie G250 50% metanolban és 10% ecetsavban) alkalmazásával, hogy megjelenítse a
többi fehérje sávot.
• Az albumin és az IgG eltávolítása a szérummintákból javíthatja az alacsony koncentrációjú glikoproteinek izolálását. Kívánt esetben használja a BioMag® ProMax
Albumin eltávolító készletet (katalógus kód BP658) és / vagy a BioMag® ProMax szérum IgG eltávolító készletet (BP659 katalógus kód).
| Katalógus szám | Leírás | Koncentráció (mg / ml) | Térfogat (ml) | Termékadatlap | Biztonsági adatlap |
|---|---|---|---|---|---|
| BM551 | BioMag Streptavidin | 5. | 5, 50 | PDS 551.pdf | SDS MB232.pdf |
| BP628 | BioMag Plus sztreptavidin | 5. | 10. | PDS 621.pdf | SDS MB232.pdf |
| BM568 | BioMag Streptavidin Nukleázmentes | 1 | 10, 25 | PDS 530.pdf | SDS MB232.pdf |
| BP621 | BioMag Plus Streptavidin / Biotin kötő készlet | 5. | 5. | PDS 621.pdf | SDS MB232.pdf SDS MB255 mosó / csatoló puffer.pdf |
Concanavalin A ELISA Kit |
|||
| 20-abx052181 | Abbexa |
|
|
BioMagPlus Concanavalin A |
|||
| BP531-10 | Bangs Laboratories | 10 ml | EUR 1399.73 |
|
Description: BioMagPlus Concanavalin A is magnetic particles with affinity binding proteins may be coated with the primary antibody or biotinylated molecule |
|||
BioMagPlus Concanavalin A |
|||
| BP531-3 | Bangs Laboratories | 3 ml | EUR 621.95 |
|
Description: BioMagPlus Concanavalin A is magnetic particles with affinity binding proteins may be coated with the primary antibody or biotinylated molecule |
|||
Concanavalin A (ConA) CLIA Kit |
|||
| 20-abx190017 | Abbexa |
|
|
Rat Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E02C0795-192T | BlueGene | 192 tests | EUR 1524 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Rat Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Rat Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E02C0795-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | EUR 624 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Rat Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Rat Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E02C0795-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | EUR 822 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Rat Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Dog Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E08C0795-192T | BlueGene | 192 tests | EUR 1524 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Canine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Dog Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E08C0795-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | EUR 624 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Canine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Dog Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E08C0795-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | EUR 822 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Canine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Pig Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E07C0795-192T | BlueGene | 192 tests | EUR 1524 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Porcine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Pig Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E07C0795-48 | BlueGene | 1 plate of 48 wells | EUR 624 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Porcine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Pig Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E07C0795-96 | BlueGene | 1 plate of 96 wells | EUR 822 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Porcine Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
Concanavalin A (ConA) ELISA Kit |
|||
| 20-abx150329 | Abbexa |
|
|
Goat Concanavalin A ELISA kit |
|||
| E06C0795-192T | BlueGene | 192 tests | EUR 1524 |
|
Description: A competitive ELISA for quantitative measurement of Goat Concanavalin A in samples from blood, plasma, serum, cell culture supernatant and other biological fluids. This is a high quality ELISA kit developped for optimal performance with samples from the particular species. |
|||
