A BrdU sejtproliferációs assay készlet egy 5-bróm-2′-dezoxiuridint (BrdU) detektál a sejt DNS-be a sejtproliferáció során anti-BrdU antitest alkalmazásával. Amikor a sejteket BrdU-t tartalmazó jelölőközeggel tenyésztjük, ez a pirimidin-analóg beépül a timidin helyett a proliferáló sejtek újonnan szintetizált DNS-ébe.
A jelölő közeg eltávolítása után a sejteket rögzítjük, és a DNS-t rögzítő / denaturáló oldatunkkal denaturáljuk. Ezután BrdU egér mAb-t adunk a beépített BrdU kimutatására (A DNS denaturálása szükséges a beépített BrdU hozzáférhetőségének javításához a detektáló antitesthez). Ezután anti-egér IgG, HRP-hez kapcsolt antitestet használunk a kötött detektáló antitest felismerésére. HRP szubsztrát TMB-t adunk a szín kialakításához. A kifejlődött szín abszorbancájának nagysága arányos a sejtekbe beépített BrdU mennyiségével, ami közvetlenül jelzi a sejtproliferációt.
A termék tartalmazza
Mennyiség (gróffal)
Megoldás színe
BrdU
1 x 150 µl
Javító / denaturáló megoldás
2 x 25 ml
BrdU egérdetektáló mAb
1 x 500 µl
Zöld
Anti-egér IgG, HRP-hez kapcsolt antitest
1 x 500 µl
Piros
Detektáló antitest hígító
1 x 50 ml
Zöld
HRP hígító
1 x 50 ml
Piros
20x mosópuffer
1 x 50 ml
TMB 7004 szubsztrátum
1 x 50 ml
STOP megoldás 7002
2 x 25 ml
Háttér
A halogénezett nukleotidok, például a pirimidin-analóg bromodeoxiuridin (BrdU) hasznosak az élő sejtekben és szövetekben kialakulóban lévő DNS-ek jelölésére. A BrdU beépül a timidin helyett a DNS replikálódásába, és a későbbi BrdU immundetektálása specifikus monoklonális antitestek alkalmazásával lehetővé teszi a sejtek jelölését a sejtciklus S fázisában. Miután a sejteket vagy szöveteket bróm-dezoxiuridinnal jelöltük, BrdU (Bu20a) egér mAb-vel fel lehet használni az egyszálú DNS-be beépített BrdU kimutatását.
Főbb jellemzők és részletek
Érzékenység: 40 sejt / kút
Mintatípus: Adherens sejtek, Szuszpenziós sejtek
Detektálási módszer: kolorimetrikus
Vizsgálat típusa: szendvics (kvalitatív)
Az 5-bróm-2-dezoxiuridin (BrdU) egy pirimidin-analóg. A timidin helyett beépül a szaporodó sejtek újonnan szintetizált DNS-ébe. A Biovision BrdU sejtproliferációs vizsgálati készlete egér anti-BrdU antitest segítségével detektálja a beépült BrdU-t. Anti-egér HRP-hez kapcsolt másodlagos antitestet használunk a BrdU-hoz kötött anti-BrdU antitest kimutatására, amelyet TMB (HRP szubsztrát) hozzáadása követ. A színfejlődés mértéke arányos a sejtekbe beépített BrdU mennyiségével, és közvetlenül felhasználható a sejtproliferáció indikátoraként. A többi sejtproliferációs vizsgálathoz képest ez a készlet csak a szaporodó sejteket detektálja, a beoltott sejteket nem. Ez a rendkívül érzékeny, nem radioaktív készlet kevesebb, mint 50-100 szaporodó sejtet észlel.
BrdU Cell Proliferation ELISA Kit (colorimetric)
METABOLIKUS SZaporítás Tesztek
A metabolikus aktivitást mérő vizsgálatok alkalmasak a proliferáció, az életképesség és a citotoxicitás elemzésére. A tetrazóliumsók, például az MTT, az XTT és a WST-1 redukálása színes formazán-vegyületekké vagy a resazurin bioredukciója csak metabolikusan aktív sejtekben történik. Az aktívan szaporodó sejtek fokozzák metabolikus aktivitásukat, míg a toxinoknak kitett sejtek aktivitása csökken.
MTT sejtproliferációs vizsgálatok
Az MTT (3- [4,5-dimetil-tiazol-2-il] -2,5-difeniltetrazolium-bromid; tiazolil-kék) egy vízben oldódó tetrazóliumsó, amely sárgás színű oldatot eredményez, ha táptalajban vagy fenolpirostól mentes sóoldatokban állítják elő. Az oldott MTT-t oldhatatlan lila formazánná alakítják át a tetrazólium gyűrű dehidrogenáz enzimekkel történő hasításával. Ezt a vízben oldhatatlan formazánt izopropanol vagy más oldószerek alkalmazásával oldhatjuk, és az oldott anyagot spektrofotometriásan mérjük az abszorbancia alkalmazásával az átalakított festék koncentrációjának függvényében.
Brdu Cell
XTT sejtproliferációs vizsgálatok
Az MTT-vel ellentétben az XTT hasítási terméke vízben oldódik; szolubilizálási lépés tehát nem szükséges. Az XTT tetrazóliumsót komplex sejtszerkezettel hasítják formazánra. Ez a bioredukció csak életképes sejtekben fordul elő, és összefügg a NAD (P) H termelésével glikolízissel. A képződött formazan festék mennyisége közvetlenül korrelál a tenyészet metabolikusan aktív sejtjeinek számával.
WST-1 sejtproliferációs vizsgálatok
A stabil tetrazóliumsót, a WST-1-et oldható formazánra hasítják egy komplex sejtmechanizmus segítségével, amely elsősorban a sejt felszínén fordul elő. Ez a bioredukció nagymértékben függ az életképes sejtekben a NAD (P) H glikolitikus termelésétől. A képződött formazan festék mennyisége közvetlenül korrelál a tenyészet metabolikusan aktív sejtjeinek számával.