A közvetlen PCR (dPCR) egy DNS-amplifikációs módszer közvetlenül állati vagy növényi szövetmintából DNS-izolációs és tisztítási lépések végrehajtása nélkül. Ez a technika nagymértékben csökkenti a kísérleti időt és a költségeket  a genotipizálásban és a nagy volumenű projektekben . Jobb választási lehetőséget nyújt akkor is, ha nagyon kis mennyiségű minta felerősítésével járó kihívásokkal kell szembenéznie, ahol a tisztítási lépés potenciálisan minta-veszteséghez vezethet.

A dPCR sok szempontból úgy működik, mint a hagyományos PCR. Mindkét technika a templát DNS-től, a primerektől és a master mixtől vagy a PCR-reagensektől függ, és mindkettő termikus ciklert használ az amplifikáláshoz. Az elsődleges különbség a dPCR és a hagyományos PCR között a dPCR-ben alkalmazott testreszabott pufferek. A dPCR módosított elemei robusztus amplifikációt tesznek lehetővé a nyers mintákban gyakran előforduló PCR-inhibitorok jelenléte ellenére.

Az ALS SARS-CoV-2 RT-PCR 4G-t teljes egészében a portugáliai ALS fejlesztette és gyártotta, és főleg exportra tervezték. Ez az új készlet képes az összes ismert SARS-CoV-2 variáns kimutatására, beleértve a brit, a brazil és a dél-afrikai változatokat, anélkül, hogy keresztreakcióba lépne más ismert rokon vírusokkal vagy gyakori légzőszervi kórokozókkal. A célként használt genomi régiók, valamint a primerek és a hidrolízis próbák szekvenciájának megválasztása a WHO, a CDC és a DGS ajánlásain alapult.

Az ALS SARS-CoV-2 RT-PCR 4G készlet egy  in vitro  diagnosztikai orvosi eszköz (CE-IVD), amely valós idejű PCR nukleinsav-amplifikációs technológiát alkalmaz a SARS-CoV-2 kimutatására a felső légúti klinikai mintákban. olyan személyek traktusa, akiket gyaníthatnak vagy nem gyaníthatnak COVID-19-re.

A készlet RT-PCR technikát alkalmaz, kombinálva a vírusgenom egyes régióinak amplifikációját a specifikus hidrolízisszondákkal történő kimutatásával. A SARS-CoV-2 genom célrégiói erősen konzerváltak, és két specifikus génnek felelnek meg: ORF poliprotein (ORF1ab gén) és nukleokapszid foszfoprotein (N gén). A készlet képes detektálni azt a gént is, amely a burkolat strukturális fehérjét (E gén) kódolja a Sarbecovirus al nemzetségre.

• Gyors amplifikáció : A polimeráz amplifikációs sebessége 6 kb / perc. 1 kb-os fragmentum 25 percen belül amplifikálható.
• Hosszú fragmens-amplifikáció:  A plazmid, a λ DNS és más egyszerű templátok esetében a polimeráz hatékonyan képes amplifikálni> 20 kb-ot. A genom szempontjából a polimeráz hatékonyan képes amplifikálni> 8 kb-ot. A cDNS esetében pedig a polimeráz képes hatékonyabban amplifikálni> 8 kb-ot.
• Magas specifitás:  A melegindítási technológiával a polimeráz 50% C alatt 100% -ban inaktív, és csak 5 percig 95 ° C-on történő hevítéssel állítható helyre.
• Nagy tolerancia a szennyeződésekkel szemben:  A teljes vér, a szérum, a tenyésztett sejtek és a vizelet mintái közvetlenül amplifikálhatók előzetes DNS-tisztítás nélkül.

Egység meghatározása

Az egyik egység az az enzimmennyiség, amely szükséges ahhoz, hogy 10 perc mól dNTP beépülését egy savban oldhatatlan anyagba 30 percen belül 74 ° C-on katalizáljuk.