A fertőző fehérjéket (prionokat) ironikus módon a proteolitikus emésztéssel szembeni ellenálló képességük határozza meg. A prionfehérje (PrP Sc ) átvihető izoformájának meghatározó jellemzője a proteináz K (PK) emésztéssel szembeni részleges ellenállása. A prionbetegség diagnosztizálása tipikusan a PK által emésztett PrP Sc immundetektálásán alapul Western blot, ELISA vagy immunhisztokémiai detektálás útján. PK emésztést alkalmaztak a prion törzsek közötti különbségek kimutatására is. Így a PK kulcsfontosságú eszköz volt a prionok terjedésének detektálására és ezáltal ellenőrzésére.
A PK-t a PrP szerkezetének vizsgálatára szolgáló eszközként is alkalmazták. Tömegspektrometriát és antitesteket használtunk a PK hasítási helyek azonosítására a PrP Sc-ben . Ezeket az eredményeket használtuk fel a PrP Sc -ben lévő β-szálas komponenseket összekötő, hozzáférhetőbb, rugalmasabb szakaszok azonosítására . Ezeket az adatokat a spektroszkópiai eredmények által előidézett fizikai kényszerekkel kombinálva a PrP Sc szerkezetének kvalitatív modelljére tettünk javaslatot . Feltételezve, hogy a PrP Sc egy négyfokú β-szolenoid, a PrP szekvenciát felforgattuk, hogy kielégítsük a PK proteolízis adatait és egyéb kísérleti korlátokat.
A biológiai termékek, például a terápiás fehérjék, monoklonális antitestek, vakcinák, valamint a sejt- és génterápiás termékek egyre fontosabbá váltak. Ellentétben a hagyományos kémiailag szintetizált gyógyszerekkel, amelyek a fehérje hidrofób zsebében hatnak egy kináz útvonal aktiválására vagy gátlására, a bioterápiás gyógyszerek farmakológiai hatása a célhoz való kötődésen vagy az immunmoduláción keresztül történik.
A biológiai termékek összetett jellege miatt a tudósok a korai gyógyszerfelfedezéstől a fejlesztésig számos kihívással szembesülnek. Például a kívánt immunogenitású klón azonosítása során, amely kimutathatja a célhoz kötődési specifitást és az azt követő modulációt, vagy kiválthatja a kívánt immunválaszt, valamint a klónok jellemzése, méretnövelés és ezen termékek előállítása során.
A felfedezéstől a gyártásig a nagy molekulájú gyógyszerek felhasználása a biztonságos és hatékony terápiák létrehozásáig összetett és drága. A PerkinElmer lehetővé teszi a tudósok számára, hogy fejlesszék és korszerűsítsék teljes biológiai munkafolyamatukat, így képesek legyőzni ezeket a kihívásokat, és következetes, jó minőségű, biológiai gyógyszereket hozhatnak gyorsabban piacra.
A gyógyszerfelfedezés korai szakaszában kritikus fontosságú megérteni a célbiológiát, a hatásmechanizmust (MoA) a legpontosabb műszerekkel, beleértve az automatizálást és a szoftvereket, hogy egyszerűsítsék a komplex munkafolyamatokat a klónok kiválasztásától és expressziójától kezdve az ólom felfedezéséig és szűréséig.
Gyorsítsa fel biomolekuláris felfedezését az in vitro és az in vivo technikák kombinációjával, amelyhez nagy teljesítményű szoftver társítja az adatokat betekintéssé.
Sejtképalkotás a cél in vitro validálásához
In vivo képalkotás a cél felfedezéséhez
Rendkívül interaktív megjelenítés, amely megkönnyíti a vegyületek gyors izolálását a további elemzés kulcsfontosságú kritériumai alapján
In silico
A Thermo Scientific Proteinase K széles spektrumú endolitikus proteáz, amelyet széles körben használnak a fehérjék emésztésére nukleinsavkészítményekben. Detergensek jelenlétében is lebontja a fehérjéket. A proteináz K hasítja a peptidkötéseket az alifás, aromás vagy hidrofób aminosavak karboxil oldalán. A Proteinase K szerin proteáznak minősül. A legkisebb peptid, amelyet ezen enzim hidrolizál, a tetrapeptid.
Proteinase K, recombinant
Főbb jellemzők
• Felhasználásra kész oldat • Aktív a reakciókörülmények széles skálájában
Alkalmazások
• Genom DNS izolálása egér farokból • Genom DNS izolálása tenyésztett sejtekből • DNázok és RNázok eltávolítása, amikor a DNS-t és RNS-t izolálják szövetekből vagy sejtvonalakból • Az enzim lokalizációjának meghatározása • A PCR-termékek klónozási hatékonyságának javítása
Megjegyzés
• A Proteinase K ajánlott munkakoncentrációja 0,05–1 mg / ml. A enzim aktivitását stimulálja 0,2 1% SDS-t, vagy 1 és 4 közötti M karbamidot • Ca2 + védi proteináz K szembeni autolízis, növeli a termikus stabilitás, és van egy szabályozó funkció a szubsztrát kötőhelye a proteináz K • keresztül stabil széles pH-tartomány: 4,0–12,5 , optimális pH 7,5–8,0 • Optimális aktivitás 50–55 ° C-on • Az enzim gyors denaturációja 65 ° C feletti hőmérsékleten történik
